序号

实验项目

实验内容及要求

学时

实验

类型

1

电泳技术的发展及在生命科学研究中的应用

电泳技术的基本原理。电泳技术研究进展。电泳技术种类。聚丙稀酰胺凝胶电泳（PAGE）：PAGE的原理，不连续系统的浓缩效应、分子筛效应及电荷效应；SDS-PAGE电泳测定蛋白质分子量；等电聚焦电泳测定蛋白质纯度和pI；对角线电泳；双向电泳；毛细管电泳。影响凝胶聚合和电泳分辨率的因素。实验技术部分：DNA的琼脂糖凝胶电泳。PAGE盘状电泳分离血清蛋白。PAGE盘状电泳分离乳酸脱氢酶同工酶及乳酸脱氢酶同工酶酶活染色。PAGE垂直板电泳分离酯酶同工酶及酶活染色。PAGE垂直板电泳分离过氧化物同工酶及酶活染色。SDS聚丙稀酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量。等电聚焦电泳测蛋白质的等电点（部分学生操作）。LKB公司生产的多功能电泳仪的仪器装置及功能（在国家草地专业实验室进行）。凝胶干板制作。凝胶成像定量分析系统的工作原理演示。

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综合

2

免疫生物化学实验系列

免疫动物及佐剂的选择。抗原抗体的制备及纯化。免疫化学研究进展。免疫化学在生命科学研究中的应用。试验技术部分：兔抗人血清抗体的制备（部分学生操作）。免疫双扩散测定抗体效体（增微生物材料）。微量免疫电泳—兔抗人抗体的鉴定。对流免疫电泳法—兔抗人抗体的鉴定。对流免疫电泳法测定胎儿甲种球蛋白。火箭免疫电泳（增微生物材料）。ELASA检测TNF的单克隆抗体（在遗传与细胞研究所进行）。

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综合

3

层析实验技术系列

理论知识部分：层析实验技术的种类、研究进展及应用。离子交换层析的原理及技术。分子筛层析的原理及技术。亲和层析的原理及技术。HPLC层析的原理及技术。气相层析的原理及技术。其它层析实验技术介绍—吸附层析、疏水层析、反向层析等。实验技术部分：多糖相对分子质量(Mr)的测定—凝胶过滤法。凝胶层析的基本原理及其应用。凝胶层析中主要参数V₀ 、V_t 、V_i 、V_e 、K_ad 、K_d的概念。凝胶层析法测定Mr的原理。凝胶介质的预处理及装柱等层析基本操作。选择曲线的制作。未知蛋白Mr的测定。V₀ 、V_t 、V_i 、V_e的测定及数据处理。影响层析分辨率的主要因素。离子交换柱层析分离核苷酸。层析操作中故障的分析及排除方法。恒压瓶、自动部分收集器、紫外检测仪、记录仪的使用方法。

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综合

4

生物大分子的分离纯化与鉴定

理论知识部分：生物大分子制备的前处理。生物大分子的分离纯化。生物大分子的浓缩、干燥和保存。生物大分子含量的测定和纯度鉴定。实验技术部分：（一）中草药中糖类物质的分离与测定。单寡糖的提取与定量—酚硫酸法。单糖的分离与鉴定—纸层析法。多糖的提取与定量。多糖的粗分级—酸性乙醇分步沉淀法。糖三甲基硅烷衍生物的制备。多糖组成成分分析—气相色谱法。多糖的纯度鉴定—Sepharose CL-4B柱层析。多糖的纯度鉴定—DEAE-Sephadex A25柱层析。（二）细胞色素C的制备与测定。细胞色素C的性质及其生物学作用。细胞色素C的制备原理：生物材料预处理，纯化过程中应用溶解度差异，盐溶，盐析，等电点沉淀，沸石特异吸附性质，有机酸沉淀，透析等生化性质及技术。生物材料预处理。细胞色素C粗品的制备过程。离子交换树脂的处理。细胞色素C的精制。细胞色素C含量的测定。

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综合