《生物化学实验》教学大纲

作者: 时间:2007-04-18 点击数:

课程名称

生物化学实验Biochemistry Experiment

课程负责人

张丽萍

开课学期

春季/秋季

课程编号

LIF401

实验类型

基础、综合与设计

实验类别

专业基础

实验学分

3学分

实验要求

必修

适应专业

生物科学 生物技术

环境科学 应用化学

实验学时

120

制定时间

2006.12

张丽萍

周义发 孙晖

一、实验教学目的

使学生掌握生物化学基本实验方法的原理及操作方法。主要包括:生物大分子分离纯化的主要手段,如离心、比色、电泳、层析等技术;生物大分子性质、组成、含量测定;要求学生巩固有关化学的基本知识和实验技能;学生应用生化方法和技术从事科学研究的基本训练;培养学生的协作精神及严谨求实的科学态度。

二、教学内容、要点和课时安排

序号

实验项目

实验内容及要求

学时

实验

类型

1

蛋白质含量的测定

Folin-酚法测定原理;相关的蛋白质含量测定方法:凯氏定氮法、双缩脲法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法;标准曲线法的应用、作图及计算;测定操作中的注意事项;紫外分光光度计的原理及使用方法。

8

基础

2

核酸的制备及含量测定

酵母RNA的制备;定磷法测RNA含量:定磷法测定核酸含量的原理;有机物的消化;无机磷的测定;回收率的意义及数据处理;核酸测定的其它方法;苔黑酚法测RNA含量的原理及方法;紫外吸收法测RNA含量;722型可见光、754型紫外光分光光度计的原理及利用计算机软件对数据处理。

8

综合

3

唾液淀粉酶的性质研究

温度对酶活性的影响;pH对酶活性的影响;抑制剂对酶活性的影响;酶的专一性。

4

基础

4

脲酶的活力及Km值测定

脲酶的活力测定;脲酶的Km值测定。

4

基础

5

氨基酸的分离与鉴定

氨基酸的纸层析;标准氨基酸的DNS衍生化;聚酰胺薄膜层析的原理及操作;DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜双向层析。

4

基础

6

总氮量测定-凯氏定氮法

凯氏定氮法原理;蛋白质样品的消化;改良式凯氏蒸馏仪的结构及使用方法;标准硫酸铵含量的测定及仪器回收率测算;样品含氮量测定、蛋白质浓度计算;实验操作及仪器使用注意事项;规范分析化学的基本操作技能(电子天平、容量瓶、移液管、滴定管等仪器的使用方法);掌握误差与分析数据处理的相关知识。

6

基础

7

血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定

盐析法制备球蛋白与清蛋白;清蛋白的脱盐——透析与浓缩;血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳;血清γ球蛋白的定量——双缩脲法。

6

综合

8

谷丙转氨酶的鉴定与活性单位的测定

转氨酶在机体代谢中的重要作用及其在临床诊断应用的意义;纸层析法对肝匀浆GPT活性的鉴定;待测血清样品的制备方法及注意事项;血清GPT活力单位的鉴定——24-二硝苯肼法;临床酶联法测人血清GPT活性;CCl4肝损伤模型的建立及GPT活性测定在保肝药物筛选中的应用(演示)。

6

综合

9

*不同大豆育种材料品质分析

标准溶液的配制与标定;凯式定氮法测定蛋白质的含量;索氏抽提法测定脂肪含量;大豆氨基酸水解液的制备;旋转薄膜蒸发仪回收有机溶剂;OPA氨基酸衍生物及FMOC-CL柱前氨基酸衍生物的制备(部分学生操作);HP1050高效液相色谱仪测定大豆氨基酸的组成(部分学生操作);Fossrice)多功能饲料分析仪(消化仪及定氮仪)原理及操作。

15

综合

10

蔗糖酶的提取及酶学性质的研究

蔗糖酶的制备及活性单位测定;Folin-酚法测酶提取液的蛋白质含量及比活力测定;蔗糖酶Km的测定;抑制剂对酶活性的影响;温度对酶活性的影响;pH对酶活性的影响。

8

综合

11

聚丙稀酰胺凝胶电泳(PAGE

电泳技术的基本原理。电泳技术研究进展。电泳技术种类。

PAGE不连续系统分离血清蛋白

PAGE分离乳酸脱氢酶同工酶及酶活染色

PAGE分离过氧化物同工酶及酶活染色

8

综合

12

多糖相对分子质量(Mr)的测定凝胶过滤法

凝胶介质的预处理及装柱等层析基本操作。V0 Vt Vi Ve的测定

多糖相对分子质量(Mr)的测定(选修)

8

基础

13

维生素C的测定(自带蔬菜和水果材料)

24-二硝基苯肼法的原理及方法;26-二氯酚靛酚法的原理及方法。

6

选修

14

胰岛素对血糖含量的影响

胰岛素对血糖含量的影响。

3

选修

15

动物组织(肝脾等)DNA的制备及含量测定

DNA的制备;定磷法测DNA含量;苔黑酚法测DNA含量;紫外吸收法测DNA含量;二苯胺法测DNA含量。

10

自主

设计

16

生物活性物质的测定

人参皂甙的分离、提取与测定;碱性蛋白酶活力的测定;黄酮的分离与测定;核黄素的荧光法的定量测定;微量元素的测定——湿法消化;卵磷脂的提取与定性测定——索氏提取法;维生素B2的定性实验。

16

自主

设计

      *:如果选择不同大豆育种材料品质分析,则不必再作总氮量测定。

三、使用说明

  基本实验技术采用讲授法,具体操作采用统一操作和自选材料的方式。同时,开放实验室,为学生提供自主实验的空间、时间和必要的仪器和药品资源。

  基地班及生物技术专业的学生(其他专业学生可任选)做综合性、研究性实验,并选做部分基础生物化学实验。在2学分的基础上,可获科研实践的相应学分。

  自选实验题目需预约,以便于实验室教学安排。自选实验符合学院相关规定,也可获得科研实践的相应学分。

四、考试方式

基本实验原理(笔试)20%,实验操作80%

五、教材(讲义、指导书)

罗纪盛,张丽萍等.生物化学简明教程(第三版).北京:高等教育出版社,1999.

参考书:

  1. 王镜岩,朱圣庚,徐长法主编.生物化学》(第三版).北京:高等教育出版社,2002.
  2. 吴相钰 .生物化学简明教程.北京:北京大学出版社,2001.
  3. 郑集,陈钧辉编著.普通生物化学(第三版).北京:高等教育出版社,1998.
  4. 姜招峰等 .生物化学(第二版).北京:科学出版社,2002.
  5. Reginald H. Garrett et al.Biochemistry(影印版).北京:高等教育出版社,2002.
  6. Hames BD,Hooper NM.生物化学(影印版)》(第二版).北京:科学出版社,2003.
  7. Stryer L:Biochemistry. 4th ed. New York, W. H. Freeman and company, 1995.
  8. 张龙翔等主编.生物化学实验方法和技术(第二版).北京:高等教育出版社,1997.
  9. 陈毓荃主编.生物化学实验方法和技术.北京:科学出版社,2002.
  10. 李建武等.生物化学实验原理与方法.北京:北京大学出版社,2000.
  11. 王秀奇,秦淑媛等编.基础生物化学实验(第二版).北京:高等教育出版社,1999.
  12. 林加涵等.现代生物学实验(生化篇).北京:高等教育出版社,2002.

2007/4/18

 


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