课程名称 |
生物化学实验Biochemistry Experiment |
课程负责人 |
张丽萍 |
开课学期 |
春季/秋季 |
课程编号 |
LIF401 |
实验类型 |
基础、综合与设计 |
实验类别 |
专业基础 |
实验学分 |
3学分 |
实验要求 |
必修 |
适应专业 |
生物科学 生物技术
环境科学 应用化学 |
实验学时 |
120 |
制定时间 |
2006.12 |
制 定 人 |
张丽萍 |
审 定 人 |
周义发 孙晖 |
一、实验教学目的
使学生掌握生物化学基本实验方法的原理及操作方法。主要包括:生物大分子分离纯化的主要手段,如离心、比色、电泳、层析等技术;生物大分子性质、组成、含量测定;要求学生巩固有关化学的基本知识和实验技能;学生应用生化方法和技术从事科学研究的基本训练;培养学生的协作精神及严谨求实的科学态度。
二、教学内容、要点和课时安排
序号 |
实验项目 |
实验内容及要求 |
学时 |
实验
类型 |
1 |
蛋白质含量的测定 |
Folin-酚法测定原理;相关的蛋白质含量测定方法:凯氏定氮法、双缩脲法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法;标准曲线法的应用、作图及计算;测定操作中的注意事项;紫外分光光度计的原理及使用方法。 |
8 |
基础 |
2 |
核酸的制备及含量测定 |
酵母RNA的制备;定磷法测RNA含量:定磷法测定核酸含量的原理;有机物的消化;无机磷的测定;回收率的意义及数据处理;核酸测定的其它方法;苔黑酚法测RNA含量的原理及方法;紫外吸收法测RNA含量;722型可见光、754型紫外光分光光度计的原理及利用计算机软件对数据处理。 |
8 |
综合 |
3 |
唾液淀粉酶的性质研究 |
温度对酶活性的影响;pH对酶活性的影响;抑制剂对酶活性的影响;酶的专一性。 |
4 |
基础 |
4 |
脲酶的活力及Km值测定 |
脲酶的活力测定;脲酶的Km值测定。 |
4 |
基础 |
5 |
氨基酸的分离与鉴定 |
氨基酸的纸层析;标准氨基酸的DNS衍生化;聚酰胺薄膜层析的原理及操作;DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜双向层析。 |
4 |
基础 |
6 |
总氮量测定-凯氏定氮法 |
凯氏定氮法原理;蛋白质样品的消化;改良式凯氏蒸馏仪的结构及使用方法;标准硫酸铵含量的测定及仪器回收率测算;样品含氮量测定、蛋白质浓度计算;实验操作及仪器使用注意事项;规范分析化学的基本操作技能(电子天平、容量瓶、移液管、滴定管等仪器的使用方法);掌握误差与分析数据处理的相关知识。 |
6 |
基础 |
7 |
血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定 |
盐析法制备球蛋白与清蛋白;清蛋白的脱盐——透析与浓缩;血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳;血清γ球蛋白的定量——双缩脲法。 |
6 |
综合 |
8 |
谷丙转氨酶的鉴定与活性单位的测定 |
转氨酶在机体代谢中的重要作用及其在临床诊断应用的意义;纸层析法对肝匀浆GPT活性的鉴定;待测血清样品的制备方法及注意事项;血清GPT活力单位的鉴定——2,4-二硝苯肼法;临床酶联法测人血清GPT活性;CCl4肝损伤模型的建立及GPT活性测定在保肝药物筛选中的应用(演示)。 |
6 |
综合 |
9 |
*不同大豆育种材料品质分析 |
标准溶液的配制与标定;凯式定氮法测定蛋白质的含量;索氏抽提法测定脂肪含量;大豆氨基酸水解液的制备;旋转薄膜蒸发仪回收有机溶剂;OPA氨基酸衍生物及FMOC-CL柱前氨基酸衍生物的制备(部分学生操作);HP1050高效液相色谱仪测定大豆氨基酸的组成(部分学生操作);Foss(rice)多功能饲料分析仪(消化仪及定氮仪)原理及操作。 |
15 |
综合 |
10 |
蔗糖酶的提取及酶学性质的研究 |
蔗糖酶的制备及活性单位测定;Folin-酚法测酶提取液的蛋白质含量及比活力测定;蔗糖酶Km的测定;抑制剂对酶活性的影响;温度对酶活性的影响;pH对酶活性的影响。 |
8 |
综合 |
11 |
聚丙稀酰胺凝胶电泳(PAGE) |
电泳技术的基本原理。电泳技术研究进展。电泳技术种类。
PAGE不连续系统分离血清蛋白
PAGE分离乳酸脱氢酶同工酶及酶活染色
PAGE分离过氧化物同工酶及酶活染色 |
8 |
综合 |
12 |
多糖相对分子质量(Mr)的测定—凝胶过滤法 |
凝胶介质的预处理及装柱等层析基本操作。V0 、Vt 、Vi 、Ve的测定
多糖相对分子质量(Mr)的测定(选修) |
8 |
基础 |
13 |
维生素C的测定(自带蔬菜和水果材料) |
2,4-二硝基苯肼法的原理及方法;2,6-二氯酚靛酚法的原理及方法。 |
6 |
选修 |
14 |
胰岛素对血糖含量的影响 |
胰岛素对血糖含量的影响。 |
3 |
选修 |
15 |
动物组织(肝脾等)DNA的制备及含量测定 |
DNA的制备;定磷法测DNA含量;苔黑酚法测DNA含量;紫外吸收法测DNA含量;二苯胺法测DNA含量。 |
10 |
自主
设计 |
16 |
生物活性物质的测定 |
人参皂甙的分离、提取与测定;碱性蛋白酶活力的测定;黄酮的分离与测定;核黄素的荧光法的定量测定;微量元素的测定——湿法消化;卵磷脂的提取与定性测定——索氏提取法;维生素B2的定性实验。 |
16 |
自主
设计 |
*:如果选择“不同大豆育种材料品质分析”,则不必再作总氮量测定。
三、使用说明
基本实验技术采用讲授法,具体操作采用统一操作和自选材料的方式。同时,开放实验室,为学生提供自主实验的空间、时间和必要的仪器和药品资源。
基地班及生物技术专业的学生(其他专业学生可任选)做综合性、研究性实验,并选做部分基础生物化学实验。在2学分的基础上,可获科研实践的相应学分。
自选实验题目需预约,以便于实验室教学安排。自选实验符合学院相关规定,也可获得科研实践的相应学分。
四、考试方式
基本实验原理(笔试)20%,实验操作80%。
五、教材(讲义、指导书)
罗纪盛,张丽萍等.生物化学简明教程(第三版).北京:高等教育出版社,1999.
参考书:
- 王镜岩,朱圣庚,徐长法主编.生物化学》(第三版).北京:高等教育出版社,2002.
- 吴相钰 译.生物化学简明教程.北京:北京大学出版社,2001.
- 郑集,陈钧辉编著.普通生物化学(第三版).北京:高等教育出版社,1998.
- 姜招峰等 译.生物化学(第二版).北京:科学出版社,2002.
- Reginald H. Garrett et al.Biochemistry(影印版).北京:高等教育出版社,2002.
- Hames BD,Hooper NM.生物化学(影印版)》(第二版).北京:科学出版社,2003.
- Stryer L:Biochemistry. 4th ed. New York, W. H. Freeman and company, 1995.
- 张龙翔等主编.生物化学实验方法和技术(第二版).北京:高等教育出版社,1997.
- 陈毓荃主编.生物化学实验方法和技术.北京:科学出版社,2002.
- 李建武等.生物化学实验原理与方法.北京:北京大学出版社,2000.
- 王秀奇,秦淑媛等编.基础生物化学实验(第二版).北京:高等教育出版社,1999.
- 林加涵等.现代生物学实验(生化篇).北京:高等教育出版社,2002.
2007/4/18
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